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INTRODUCCIÓN

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Para diagnosticar una infección por medio de técnicas de laboratorio es necesario demostrar de manera directa o indirecta la presencia de virus, bacterias, hongos y parásitos en los tejidos, líquidos o excreciones del hospedador. Los laboratorios de microbiología clínica son los encargados de preparar las muestras y precisar la susceptibilidad de bacterias y hongos patógenos a los antibióticos. Por lo regular, la detección de microorganismos ha dependido en buena medida de su visualización microscópica en el material, o bien de la proliferación de los patógenos en medios de laboratorio. En términos generales, la identificación se ha basado en las características fenotípicas, como los perfiles de fermentación en el caso de las bacterias; los efectos citopáticos de los cultivos hísticos en busca de agentes virales, y la morfología microscópica de hongos y parásitos. Las técnicas son fiables, pero a menudo son lentas. El empleo de sondas a base de ácido nucleico se ha tornado cada vez más el método habitual de detección, cuantificación, identificación en el laboratorio de microbiología clínica y ha sustituido de manera gradual a la definición fenotípica y los métodos de visualización microscópica. En este capítulo se revisan los conceptos generales de las pruebas diagnósticas, con énfasis en la identificación de bacterias. En capítulos distintos se realiza una revisión más amplia de la detección de microorganismos virales, micóticos y parasitarios (caps. 214e, 235 y 245e, respectivamente).

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MÉTODOS DE DETECCIÓN

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La revaloración de los métodos utilizados en el laboratorio de microbiología clínica ha permitido idear formas de reconocer patógenos mediante sistemas de detección no visual de señales biológicas. Una señal biológica es un material que puede diferenciarse las veces que sea necesario de otras sustancias presentes en el mismo entorno físico. Los aspectos fundamentales en el empleo de las señales biológicas incluyen su diferenciación de la interferencia de fondo y traducirlas en información con significado. Entre los ejemplos de señales biológicas aplicables a la microbiología clínica figuran los componentes estructurales de bacterias, hongos y virus; antígenos específicos; productos metabólicos terminales; secuencias de bases singulares de DNA o RNA; enzimas; toxinas u otras proteínas y polisacáridos de superficie.

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Se utiliza un detector para captar una señal y diferenciarla de la interferencia de fondo. Los sistemas de detección son variables, desde la propia visualización del técnico con capacidad y entrenamiento para valorar las variaciones morfológicas hasta los instrumentos electrónicos sensibles, como los cromatógrafos de gas-líquido o espectrómetros de masa. La sensibilidad de detección de las señales varía de forma amplia; es esencial utilizar un sistema de detección que diferencie grados mínimos de la señal incluso en presencia de interferencia de fondo biológica, esto es, que sea sensible y específico. Entre los sistemas de detección comunes se hallan la inmunofluorescencia; la quimioluminiscencia con sondas de DNA/RNA; la identificación (por medio de ionización de llama) de ácidos grasos de cadena corta o larga, y la detección de uso de sustratos o ...

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